Você sabia que as proteínas podem ser purificadas?
A purificação de proteínas é essencial para a determinação da propriedade e atividade de proteínas e para isso, alguns métodos são utilizados. A solução proteica passa por um processo de modificação para que possa ser purificada, por exemplo o processo de diálise, que separa as proteínas de pequenos solutos aproveitando o tamanho das proteínas em questão. O extrato parcialmente purificado é colocado em uma bolsa ou tubo feito com uma membrana semipermeável.
O tubo é imerso em uma solução de maior volume de uma solução tamponada permitindo a troca de sal e de solução tampão, sem movimentação das proteínas. Ocasionando o equilíbrio entre as soluções de fora e de dentro da membrana.
Fonte: edisciplinas.usp.br
Após esse processo, as proteínas podem ser fracionadas por:
Cromatografia em coluna
Um método que leva em conta a diferença de tamanho, carga e afinidade de ligação por outros componentes. Veja o vídeo abaixo que mostra uma experiência e explica um pouco mais sobre esse processo:
Cromatografia de troca iônica
Baseia-se na diferença no sinal e na magnitude da carga elétrica das proteínas em determinado pH. A afinidade de cada proteína pelos grupos carregados na coluna é afetada pelo pH e a concentração de íons e sais livres que competem na solução. A separação pode ser otimizada por mudanças graduais no pH e/ou na concentração de sal da fase móvel, criando um gradiente de pH ou de sal.
Cromatografia por exclusão de tamanho ou filtração em gel
Nesse método, as proteínas maiores emergem da coluna antes que as proteínas menores (ao contrário do esperado). Poros e cavidades são projetados com um determinado tamanho para que as proteínas maiores não conseguem passar, percorrendo um caminho mais curto, já as proteínas menores passam pelas cavidades e ficam presas.
Cromatografia por afinidade
Baseia-se na afinidade de ligação. Os grânulos presentes na coluna possuem um grupo químico denominado ligante, quando presente na solução, apenas as proteínas específicas se ligarão e sua migração através da matriz é retardada.
Cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC)
A HPLC funciona com o auxílio de bombas de alta pressão que, por sua vez, aumentam o movimento das proteínas ao longo da colina e também usa materiais cromatográficos de maior qualidade, podendo suportar a pressão causada pelo movimento do líquido pressurizado.
Na maioria dos casos, pode-se usar mais de um método para a purificação de proteínas, essas também podem ser purificadas por eletroforese, um processo que consiste na separação de proteínas com base na migração por conta de um campo elétrico.
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